白癜风治疗的有效方法 http://pf.39.net/bdfyy/qsnbdf/191203/7659723.html背景创伤性凝血病以血小板功能障碍为特征。虽然创伤性出血时血小板计数可以保持，但大约45%的创伤患者会发生血小板功能障碍。因此，与低剂量血小板输注相比，大剂量血小板输注可减少创伤后早期死亡率。液体储存血小板产品的保质期有限（室温下为5-7天），低温保存血小板可将其保存时间从几天延长到几年，使低温保存的血小板适合在严酷的军事环境中使用。解冻后，低温保存的血小板被激活，并在体外显示出聚集和粘附受损。在健康志愿者中，与新鲜自体血小板制剂相比，低温保存血小板自体输血后的体内恢复率降低，但其凝块形成速度更快，纤维蛋白形成不受影响。低温保存血小板制剂已用于军事和民用环境中，在临床结果方面，似乎与其他血小板制剂具有相似的性能。低温保存可能解决血小板产品的可用性或浪费问题，但低温保存血小板的广泛应用受到阻碍，这可能是由于血小板的功能丧失所致。低温保存血小板体外聚集受损和体内回收率降低与低温保存血小板的止血潜力无关，相反，可能由于活化，血小板源性胞外囊泡含量高，凝血酶生成能力增强，低温保存血小板诱导更快速的止血控制。除了与低温保存血小板控制出血的能力有关的问题外，有关其安全性的问题仍然存在。冻融诱导的血小板活化用于控制出血的优点，也可能具有增加血栓栓塞事件风险的缺点。此外，在小鼠模型中可观察到低温保存的血小板在体外具有免疫调节作用，并在随后的器官损伤中增强促炎症反应。本研究目的在于比较低温保存血小板与液体保存血小板在创伤失血性休克大鼠模型中的止血能力，并探讨其对器官损伤的影响。
材料与方法
1、血液成分制造方法：用同基因供体大鼠40只，心脏穿刺取全血，全血与柠檬酸-磷酸葡萄糖溶液按9:1的比例混合，立即离心将血液分离成三种不同的成分：血浆（?80°C储存）、富血小板血浆（22℃振荡保存或低温保存（?80°C储存））、60%压积的红细胞（4℃储存）；低温保存血小板使用前37℃解冻。2、实验过程中的测量：在创伤模型制备前（T0）、休克1小时后、输血前（T1）、3小时（T3）、4小时（T4）和实验结束后6小时（T6）采集血样。在所有时间点对血液进行动脉血气、电解质评估，并在四个时间点（T0、T1、T3和T6）进行旋转血栓弹性（ROTEM?）测定。在T0、T6两个时间点检测血小板计数，血红蛋白/红细胞压积，凝血酶原时间和纤维蛋白原水平，天冬氨酸转氨酶，丙氨酸转氨酶，肌酐和尿蛋白。
3、酶联免疫吸附试验（ELISA）：使用ELISA测定了循环中内皮细胞糖萼成分（Syndecan1）和主要血小板释放的26种损伤标志物高迁移率组蛋白B1（HGMB-1）的水平。
4、器官评估与内皮渗漏：肺、肝、脾、小肠和肾脏的苏木精和伊红染色实验等根据肺水肿、间质炎性细胞浸润、内皮细胞增多和出血对肺进行评分。每个类别的量表由0分（=无）到3分（=严重）组成。用兔抗FITC/抗兔辣根过氧化物酶和NovaRed显色法对去石蜡化的肺、肾组织切片进行染色，以面积强度的中位百分比作为内皮渗漏的测量指标。
结果
1、创伤、休克和输血需求：两组受创伤的动物都处于严重休克状态，表现为高碱缺乏、乳酸水平升高和血压降低，两组之间没有显著差异（表1，图1）。低温保存和液体储存血小板治疗的休克期大鼠控制性失血（基线样本+额外放血）加上估计的不受控制的血液损失（估计腹部失血量）间没有差异（总失血量为9.6[8.8-10.1]vs.9.7[9.0-10.3]mL，p=0.84），所有动物均存活了6小时。大鼠冻存血小板制剂的体外冻融回收率中位数为87%[69-]。与液体储存血小板输注大鼠相比，低温保存血小板输注大鼠恢复循环至预定MAP（60mmHg）所需的输血量显著减少（5.4[4.1-7.1]mL/kgvs.7.5[6.4-8.5]mL/kg，p=0.02）。根据乳酸水平和碱缺乏评估的休克程度在两组中相似。在实验过程中，各组之间的变量保持相似。2、凝血功能：创伤休克模型导致血小板计数减少，凝血酶原时间延长，纤维蛋白原水平下降，组间无差异。血小板计数在实验结束时也相同（表2），两组均为凝血障碍。创伤和复苏后，凝血酶原时间较基线延长约1.3倍，低温保存组（13.9[12.2-14.4]s）和液体保存血小板治疗组（14.2[12.7-15.8]s，p=0.36）之间无差异。此外，两组伤后6小时纤维蛋白原水平均较低，与液体保存血小板组（1.3[1.0-1.4]g/L，p=0.34）相比，低温保存血小板组（1.3[1.1-1.6]g/L）无差异。ROTEM?分析在多个时间点进行测量（图2）。创伤、失血和生理盐水稀释降低了纤维凝块强度，但对创伤后1小时内的凝血强度或凝血时间无显著影响。输注2小时后，低温保存血小板组大鼠的凝血时间（45[41-48]s）明显短于液体保存血小板组（49[45-53]s，p0.05），最大凝块硬度略有下降（68[67-68]mmvs.69[69-71]mm，p0.01）。与液体保存组相比，低温保存组的血小板对血栓形成的贡献相似（57[55-57]mmvs.59mm[54-60]，p=0.06）。两组在实验期间均未出现溶解现象。3、器官损伤：创伤导致急性肺、急性肾和急性肝损伤情况见表2、图3。低温保存和液体保存血小板治疗大鼠的肺损伤没有表现出差异，表现为相似的肺湿/干比（5.5[5.2-5.7]vs.5.2[4.7-5.6]，p=0.22）和相似的肺组织学评分（图3）。肾脏损伤无明显差异，低温保存血小板（4.3[3.9-4.7]）和液体储存血小板（4.3[3.7-4.6]，p=0.88）中的肌酐水平和肾脏湿/干比相似。此外，各组间FITC右旋糖酐从循环进入肺和肾的渗漏没有差异（表2）。糖萼降解的标志物Syndecan1在创伤后升高，但各组之间没有差异，说明与液体保存血小板相比，低温保存血小板对内皮通透性没有影响。同样，肝损伤在两组之间没有差异，由相似的ALT（丙氨酸转氨酶）水平决定。评估器官组织学评分显示各组之间没有差异（图3）。血栓形成仅发生在直接损伤部位，各组间无差异。无直接外伤的器官无血栓形成。
讨论
在大鼠创伤输血模型中输注低温保存的血小板可以缩短凝血时间，减少输血需求。就器官损伤而言，低温保存的血小板似乎和液体储存的血小板一样安全。这一结果为临床研究低温保存血小板治疗外伤性出血的有效性和安全性提供了理论依据。
参考文献
KleinveldDJB,SloosPH,NoormanF,etal.Theuseofcryopreservedplateletsinatrauma-inducedhemorrhagemodel[publishedonlineaheadofprint,Jun27].Transfusion.;10./trf..doi:10./trf..
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